保存生物材料方法(保藏菌種的方法)

1.保藏菌種的方法有哪些

1、傳代培養(yǎng)保藏法：包括又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等，培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。

2、液體石蠟覆蓋保藏法：液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間。

3、載體保藏法：載體保藏法是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法。

4、寄主保藏法：寄主保藏法用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物。

5、冷凍干燥保藏法：先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥），其中真空冷凍干燥法最常見(jiàn)。

擴(kuò)展資料

菌種保藏的原理：

菌種保藏有多種方法，其原理大多大同小異，主要是運(yùn)用一些方式盡量降低生物體內(nèi)的代謝，達(dá)到延長(zhǎng)生命，減少變異的目的。通常采用的方法為低溫、缺氧、干燥。

低溫主要對(duì)菌種產(chǎn)生兩方面的影響，首先，較低的溫度可以減緩機(jī)體細(xì)胞的酶活，降低新陳代謝，達(dá)到保藏菌種的目的。其次，低溫同時(shí)會(huì)導(dǎo)致菌體誘發(fā)菌絲自溶機(jī)制，如果降溫過(guò)程失誤，同樣會(huì)造成機(jī)體的機(jī)械損傷和溶質(zhì)損傷。

參考資料來(lái)源：百度百科——菌種保藏

2.生物保鮮技術(shù)有哪些

直接用微生物菌體保鮮 目前人們也有直接用微生物菌體對(duì)食品的保鮮防腐進(jìn)行研究。例如劉紹軍等人[9]用啤酒酵母菌對(duì)草莓進(jìn)行了保鮮研究。結(jié)果啤酒酵母菌對(duì)草莓的后熟起到推遲作用而減輕草莓腐爛程度。歐體庫(kù)爾?瑪合木提等人[10]從葡萄表面分離到一株鏈霉菌H2用于新疆甜瓜的防腐保鮮。在綠茶中摻入嫌氣性蠟樣芽孢桿菌經(jīng)低溫處理對(duì)茶葉的保鮮，該技術(shù)已獲得了中國(guó)發(fā)明專利（專利號(hào)CN1145177A）。國(guó)外對(duì)一種有益真菌Trichodermaharzanium進(jìn)行了新西蘭獼猴桃的防霉研究。結(jié)果表明，用此方法保護(hù)的6000只新西蘭獼猴桃不受霉菌侵染達(dá)1a之久。而沒(méi)被處理的獼猴桃有一半被Botrytiscinerea霉菌破壞

多糖類(lèi)物質(zhì)保鮮細(xì)菌、真菌和藍(lán)藻類(lèi)產(chǎn)生的微生物多糖，因其安全無(wú)毒、理化性質(zhì)獨(dú)特等而倍受關(guān)注。微生物大量產(chǎn)生的多糖，易與菌體分離，可通過(guò)深層發(fā)酵實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。微生物多糖已作為成膜劑、保鮮劑應(yīng)用于食品、制藥等多個(gè)領(lǐng)域。例如普魯蘭多糖因其無(wú)味、無(wú)嗅、無(wú)毒、可食用，良好的成膜性，以及優(yōu)良的阻氧效果，可用于食品保鮮作用。從蝦、蟹、昆蟲(chóng)等節(jié)肢動(dòng)物的外殼及真菌、藻類(lèi)等低等植物細(xì)胞壁中的早殼素經(jīng)酸化所得的含氮多糖類(lèi)物質(zhì)即殼聚糖，因其具有良好的成膜性與抑菌作用而應(yīng)用于果蔬的保鮮。對(duì)柑橘、草莓、蘋(píng)果、獼猴桃、黃瓜、青椒、番茄的保鮮試驗(yàn)可知[1]：只需017%~2%的殼聚糖的溶液噴灑在果蔬的表面即可在果實(shí)表面形成一層薄膜，可阻止果實(shí)吸收O2與CO2的排出，從而延緩果實(shí)的熟化，達(dá)到保鮮的目的

3.常用的菌種保存方法有哪些

菌種保藏是食用菌產(chǎn)業(yè)的一項(xiàng)基礎(chǔ)工作，是確保野生種質(zhì)資源基因留存和現(xiàn)有生產(chǎn)用種遺傳性能相對(duì)穩(wěn)定的必要手段。

菌種保藏的方法多種多樣，有的雖然保藏效果好，但投資高或操作繁雜。在生產(chǎn)實(shí)踐中，更需要設(shè)備投入少，能保障菌種不死亡、不污染、最大限度地保持優(yōu)良種性的簡(jiǎn)便方法，如斜面低溫短期保藏和自然基質(zhì)較長(zhǎng)期保藏相結(jié)合的方法。

一般而言，對(duì)母種進(jìn)行長(zhǎng)期保存，對(duì)原種進(jìn)行短期保存。須保證優(yōu)良菌種的性狀和活力不發(fā)生變異，不死亡，不被污染，確保其純度。

因此，保存方法應(yīng)具備取材容易、操作方便、菌種不易退化、長(zhǎng)期保存不污染雜菌等優(yōu)點(diǎn)。常用的菌種保存方法如下：（一）斜面低溫保藏 該法的優(yōu)點(diǎn)是保藏方便且所占空間較小。

具體做法是：菌絲長(zhǎng)滿斜面后，放在0~5℃保存。以后每隔一定時(shí)間（2~3個(gè)月）轉(zhuǎn)管一次。

轉(zhuǎn)管保存不能長(zhǎng)期用PDA培養(yǎng)基，否則種性易退化，灰樹(shù)花降解木質(zhì)纖維素的能力減弱。因此隔一定時(shí)間（1年左右）須把菌種轉(zhuǎn)接到木屑培養(yǎng)基上復(fù)壯，之后挑選健壯無(wú)污染的菌絲再轉(zhuǎn)回PDA培養(yǎng)基保存。

在長(zhǎng)期保存過(guò)程中，要防棉塞受潮滋生雜菌。菌種試管口最好用蠟燙封，以防培養(yǎng)基內(nèi)水分過(guò)快蒸發(fā)。

增加瓊脂用量（2.5%~3%）可減緩水分蒸發(fā)。還要防止菌種管上的標(biāo)簽脫落而造成種系混雜。

斜面低溫保藏方法簡(jiǎn)便易行，能隨時(shí)觀察保藏菌株的活力和純度，一旦染雜，肉眼能及時(shí)發(fā)現(xiàn)。（二）自然基質(zhì)保藏 此法是根據(jù)灰樹(shù)花的特性，利用自然基質(zhì)保藏其菌種的方法。

灰樹(shù)花是木腐菌，可以采用以木屑為主料的培養(yǎng)基。自然基質(zhì)營(yíng)養(yǎng)全面，且大部為緩釋養(yǎng)分，不易產(chǎn)生營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩或饑餓；其次，培養(yǎng)基理化性狀好，可吸收或緩沖菌絲代謝出的有害物質(zhì)，水分與通氣協(xié)調(diào)平衡，部分菌絲扎入基質(zhì)內(nèi)生長(zhǎng)，不裸露于空氣中，菌絲呼吸強(qiáng)度低，生命力強(qiáng)。

1.原料與配方 粗、細(xì)木屑比例適當(dāng)，采用板栗樹(shù)木屑最佳，粗木屑粒徑為2毫米左右，細(xì)木屑為一般圓盤(pán)鋸屑，粗、細(xì)的比例為1∶2，添加干木屑重量20%的麩皮和1%的糖，含水率為60%左右。這樣的基質(zhì)通氣性好，營(yíng)養(yǎng)豐富且供菌絲分解利用的時(shí)間長(zhǎng)，長(zhǎng)到基質(zhì)內(nèi)部的菌絲比包裹在基質(zhì)外部暴露于空氣中的菌絲耐受性強(qiáng)。

不同粒徑的基質(zhì)比例適當(dāng)，還能協(xié)調(diào)氣與水的矛盾。粗粒過(guò)多，架空菌絲多；細(xì)粒過(guò)多，透氣性差，菌絲生長(zhǎng)慢。

應(yīng)用配方如下：栗木屑78%，麩皮20%，石膏1%，蔗糖1%，水65%配料，裝入較粗大的試管中，裝料量為試管的1/3~1/2,1.5千克/厘米2滅菌1.5小時(shí)。冷卻后，接入需保藏的菌種，在28℃下培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿木屑培養(yǎng)基時(shí)取出換上無(wú)菌橡皮塞，在0~5℃冰箱內(nèi)保藏1~2年轉(zhuǎn)管一次。

2.容器與裝量 采用容量250毫升的葡萄糖玻璃瓶，清洗潔凈，裝量一般不超過(guò)玻璃瓶容量的3/5，填料不能過(guò)滿，瓶壁所殘留的顆粒須擦拭干凈，否則保藏的菌種易引起污染。3.滅菌和冷藏 滅菌時(shí)若采用棉塞封口，基質(zhì)表層易失水，接種成活率低，即使菌絲復(fù)活，生長(zhǎng)也很緩慢，所以最好采用聚丙烯膜封口，接種后換用無(wú)菌棉塞培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿后再換成有孔滅菌膠塞冰箱保藏。

用上述方法保藏的菌種經(jīng)3年貯放后，接出成活率均達(dá)90%以上，出菇驗(yàn)證產(chǎn)量及子實(shí)體形態(tài)特征均無(wú)明顯變化。因此，自然基質(zhì)保藏法具有保存期長(zhǎng)，菌種遺傳性能相對(duì)穩(wěn)定的特點(diǎn)。

（三）木粒PDA斜面保藏 灰樹(shù)花在自然狀態(tài)下易發(fā)生于栗樹(shù)根部，這說(shuō)明其營(yíng)養(yǎng)需求較為特殊。根據(jù)灰樹(shù)花這種習(xí)性，在PDA基礎(chǔ)上添加適量的栗樹(shù)木粒制成母種培養(yǎng)基。

在多年的使用中發(fā)現(xiàn)，用該培養(yǎng)基培養(yǎng)的母種生長(zhǎng)勢(shì)好，在轉(zhuǎn)接原種時(shí)，適應(yīng)能力強(qiáng)，萌發(fā)定植快；用作菌種保藏基質(zhì)時(shí)，保藏時(shí)間長(zhǎng)，并能很好保持菌種的優(yōu)良性狀。1.木粒PDA的制作 選取栗樹(shù)邊材，加工成0.3~0.5厘米的顆粒，及時(shí)烘干或曬干備用。

稱取葡萄糖10克，KH2PO41克，1溶解于1升清水中配制成營(yíng)養(yǎng)液。將營(yíng)養(yǎng)液倒入盛有木粒的小鋁鍋中，營(yíng)養(yǎng)液以完全浸沒(méi)木粒為準(zhǔn)。

煮沸10分鐘，以加快木粒對(duì)營(yíng)養(yǎng)液的吸收速度，起鍋靜置30分鐘讓木粒吸足營(yíng)養(yǎng)液。撈出木粒，瀝掉表面的水，裝入試管，裝量為試管長(zhǎng)的1/6，最多不得超過(guò)試管長(zhǎng)的1/5，否則在擺制斜面時(shí)，不易使木粒均勻分散于斜面的表面上。

選取新鮮的馬鈴薯，去皮并切成薄片，稱取200克放入小鋁鍋中，加入1升清水，文火煮沸30分，趁熱過(guò)濾取汁，并補(bǔ)足1升的體積。稱取瓊脂20克，葡萄糖20克，KH2PO4 2克，MgSO47H2O 2克。

先將瓊脂剪碎，加入到馬鈴薯濾液中，繼續(xù)用文火加熱，使瓊脂溶化。待瓊脂完全溶化后，加入稱好的其他3種營(yíng)養(yǎng)成分，攪拌使這些物質(zhì)溶解均勻，趁熱裝入已裝有木粒的試管中，裝至試管長(zhǎng)的1/3處，塞上棉塞。

在0.8~1千克/厘米2蒸氣壓下滅菌40分，待氣壓降至0時(shí)，開(kāi)蓋取出，趁熱輕輕抖拍試管，使木粒分散后即可擺制斜面，并使木粒呈半裸狀分布于斜面上，待凝固后便制成了木粒PDA培養(yǎng)基。2.生長(zhǎng)及保藏效果 木粒PDA斜面上培養(yǎng)的灰樹(shù)花母種，菌絲生長(zhǎng)迅速、良好，12天即可長(zhǎng)滿試管，但菌絲的后期生長(zhǎng)勢(shì)更為粗壯、濃密，后勁足。

轉(zhuǎn)接原種時(shí)，菌種適應(yīng)力強(qiáng)，定植快。這表明，灰樹(shù)花菌絲的生長(zhǎng)速度、生長(zhǎng)勢(shì)不僅取決于本身的遺。

4.微生物檢驗(yàn)材料的保存方法是什么

微生物檢驗(yàn)材料的保存方法如下：（1）液體樣品。

黏液、滲出物、膽汁、血液等，最好收集 在滅菌的小試管或青霉素瓶中，密封后用紙或棉花包裹，裝人較 大的容器中，再裝瓶（或盒）送檢。（2）做棉試蘸取的鼻液、濃汁、糞便等樣品。

應(yīng)將每支棉 試剪斷或燒斷，投入滅菌試管內(nèi)，立即密封管口，包裝送檢。（3）實(shí)質(zhì)臟器。

在短時(shí)間內(nèi)（夏季不超過(guò)20小時(shí)，冬季不 超過(guò)2天）能送到檢驗(yàn)單位的，可將樣品的容器放在裝有冰決的 保溫瓶?jī)?nèi)送檢。短時(shí)間不能送到的，供細(xì)菌檢查的，放于滅菌流 動(dòng)石蠟或滅菌的甘油生理鹽水中保存；供病毒檢查的，放 于滅菌的50%甘油生理鹽水中保存。

5.儲(chǔ)存食物的方法有哪些

食物種類(lèi)繁多，性質(zhì)各異，適應(yīng)的環(huán)境各不相同。因此儲(chǔ)存食物首先要熟悉各種食物的特點(diǎn).了解影響食物變化的原因，采取適當(dāng)?shù)拇鎯?chǔ)方法。只有這樣才能有效保持食物的外觀（形狀、色澤）和內(nèi)在的質(zhì)量（質(zhì)地、營(yíng)養(yǎng)成分），防止烹飪食物發(fā)生腐爛、腐敗、變質(zhì)等情況，減少不必要的損失，避免浪費(fèi)。

一、低溫儲(chǔ)存法

低溫儲(chǔ)存法是儲(chǔ)存烹飪食物級(jí)常用的方法。其主要原理是通過(guò)低溫有效地抑制微生物的生長(zhǎng)和繁殖，降低酶的活性，減弱食物內(nèi)的化學(xué)反應(yīng)，較好的保持食品原有的風(fēng)味和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。

低溫儲(chǔ)存按其溫度的不同可分為冷藏法和冷凍法，冷藏的溫度是在冰點(diǎn)以上。

采用冷藏的食物主要有蔬菜、鮮肉、鮮魚(yú)、水果、奶制品以及熟制品和半成品等食物。冷凍法是將食物在低于冰點(diǎn)的環(huán)境中凍結(jié)，適用于儲(chǔ)存動(dòng)物性食物等。冷凍法可以使食物保存較長(zhǎng)的時(shí)間不變質(zhì)。但是長(zhǎng)時(shí)間存放，雖然食物的質(zhì)且變化不大.但水分減少，其背養(yǎng)價(jià)值降低，吃起來(lái)口感也不好。另外，兩種以上食物存放在同一個(gè)冷凍箱內(nèi)時(shí)，要用無(wú)毒害的食品袋密封隔離。預(yù)防氣味相互污染.同時(shí)也可減少食物水分的流失。

二、高溫儲(chǔ)存法

高溫儲(chǔ)存法是餐飲業(yè)儲(chǔ)存食物經(jīng)常使用的方法，因?yàn)槲⑸飳?duì)高溫的承受能力弱，當(dāng)溫度提高時(shí)可有效地殺滅微生物.并破壞酶的活性.可防止微生物對(duì)食物的影響，達(dá)到儲(chǔ)存食物的目的。其方法是先將食物用開(kāi)水煮透或蒸透（達(dá)到100度以上的高溫），取出或仍用原湯泡上.放在涼爽通風(fēng)的地方不攪動(dòng)，防止食物重新被污染。采用此方法可使食物在較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)不變質(zhì)。這種方法適用于保存動(dòng)物性食物的成品和半成品以及水發(fā)干貨類(lèi)等食物。

三、通風(fēng)儲(chǔ)存法

通風(fēng)儲(chǔ)存法主要適用于保存糧食、干貨食物和需要風(fēng)干的食物.它們的特點(diǎn)都是怕霉、怕捂。例如米、面、花生、蔬菜等食物，在儲(chǔ)存的時(shí)候都需要通風(fēng).這樣可使霉菌不易生長(zhǎng)，保持食物的原有成分，減少霉變。

四、腌、漬、醬、泡儲(chǔ)存法

此種方法一般是用鹽、糖、醋、醬和五香料，按照一定的比例方法加人食物內(nèi)，使食物吸收一定的濃度。來(lái)抑制微生物的生長(zhǎng).達(dá)到長(zhǎng)期保存食物的目的。例如：腌菜制品有咸蘿卜條、咸豆角、糖醋蒜等。醬菜制品有醬五香大頭菜、醬黃瓜、醬八寶菜等。泡菜制品有泡洋白菜、泡辣椒、泡茄子等。

通過(guò)腌、漬、醬、泡等處理后的食物，一般營(yíng)養(yǎng)價(jià)值會(huì)降低，因?yàn)槭澄镏幸徊糠志S生素、無(wú)機(jī)鹽被破壞和損失.特別是動(dòng)物性食物的纖維肌會(huì)變硬.不易被人體吸收消化。但是加工烹調(diào)后香味濃郁，口味極好。這種儲(chǔ)存食物的方法簡(jiǎn)單易行，在飲食行業(yè)中得到廣泛應(yīng)用。

五、煙熏儲(chǔ)存法

煙熏是用鋸未、松拍枝等材料，在不完全燃燒的情況下所產(chǎn)生的煙氣來(lái)熏烤食品的一種方法，經(jīng)煙熏后的食物不但減少了食物內(nèi)部的水分，而且煙氣中有殺菌和防腐作用的木焦油、雜酚油等附在食物的表面上.能防止細(xì)菌的生長(zhǎng)，從而達(dá)到防腐儲(chǔ)存的作用，一般常見(jiàn)的熏制品有熏魚(yú)、熏雞、熏肉等。

六、真空密封保存方法

真空密封保存方法是使食物在真空的狀態(tài)下，不與空氣中的微生物接觸.進(jìn)行密封保存食物的一種方法，如罐裝制品、真空包裝制品等。此方法適用于多種食物的保存。

隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，儲(chǔ)存食物的方法也越來(lái)越多，如核輻射儲(chǔ)存法、氣調(diào)

法等都是比較先進(jìn)的方法，它們的主要原理就是控制或殺死食物中生長(zhǎng)的微生物，延緩原料內(nèi)部組織新陳代謝，從而延長(zhǎng)食物的保存時(shí)間，提高儲(chǔ)存的質(zhì)量，達(dá)到保存的目的。

6.如何保存基因材料

基因重組的材料是基因片段（含有目的基因）。那么，這些用于基因重組的基因片段是怎樣保存的呢？生命體的細(xì)胞中含有該生物遺傳的全部密碼。為了改造某一生物，把含有目的基因的片段導(dǎo)入該生物的細(xì)胞中去，才能培育出帶有外源基因的轉(zhuǎn)基因生物（動(dòng)物、植物或微生物）。問(wèn)題是這個(gè)含有外源基因的片段，不是隨時(shí)隨地可以覓到的，必須事先保存在一個(gè)地方，這就是基因文庫(kù)。它是存放基因的“倉(cāng)庫(kù)”。

生物的全部基因就在細(xì)胞內(nèi)的DNA上，這是一條很長(zhǎng)的鏈。指揮生物的一切秘密全在上面。遺傳工程科學(xué)家為了基因重組方便，就采取先把一種生物細(xì)胞中的全部DNA或染色體上的DNA的所有片段，隨機(jī)地連接到基因載體上，然后移植到宿主細(xì)胞中進(jìn)行增殖，形成各個(gè)片段的無(wú)性繁殖系。這樣，該生物的全部基因片段就在宿主細(xì)胞內(nèi)一個(gè)不留地全部復(fù)制出來(lái)。

這好比拍電影，先拍分鏡頭（相當(dāng)于基因片段），拍好全部鏡頭后進(jìn)行剪接，配上錄音，就是一部電影了。有了這個(gè)電影片子，就可以復(fù)制出許許多多相同內(nèi)容的電影。

從70年代起，科學(xué)家已建立了大腸桿菌、酵母菌、果蠅、雞、兔以及大豆、水稻等多種生物的基因文庫(kù)。我們要取這些生物的任何一個(gè)基因片段進(jìn)行重組，都非常容易了。

用于偵破的基因指紋

大家知道，在現(xiàn)代偵破手段中，利用指紋尋找罪犯，捉拿兇手，是非常有效的。這是因?yàn)槭澜缟蠋缀鯖](méi)有兩個(gè)人的指紋是相同的。不同的指紋，實(shí)際就代表不同的人。只要在自己的指頭上涂以油墨或者印泥，捺在白紙上就能印出清楚的指紋。因此，在犯罪現(xiàn)場(chǎng)尋覓指紋是極其重要的任務(wù)。

現(xiàn)在還有利用基因指紋作為偵破手段的?；蛑讣y是遺傳學(xué)上的概念。原來(lái)，人的基因雖然大體上都是一致的，但是仍有不同，而且同樣找不出兩個(gè)人會(huì)有相同的基因（雙胞胎也有微小區(qū)別）。根據(jù)基因密碼，經(jīng)過(guò)特殊處理，也會(huì)顯示出如同條形碼那樣的紋形——黑白相間，這就是基因指紋。

現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)能從一滴血、一根頭發(fā)或者一口唾液中發(fā)現(xiàn)基因指紋。如果是一個(gè)殺人犯，他在與被害者搏斗過(guò)程中，很可能弄破自己的皮膚而留下極少的血跡。刑偵人員從血跡中就可以找到基因指紋。當(dāng)刑偵人員從疑犯身上獲得基因指紋，如與現(xiàn)場(chǎng)血跡的基因指紋一致，那么疑犯就成了百分之百的兇手。至于對(duì)強(qiáng)奸犯的偵破，利用精液獲得基因指紋，在國(guó)外已經(jīng)成了常用的偵破手段。

基因指紋用于現(xiàn)代偵破雖然歷史還很短，但已經(jīng)受到特別的重視。

7.專利申請(qǐng)對(duì)生物材料保藏有什么規(guī)定

專利申請(qǐng)涉及從未公開(kāi)過(guò)的生物材料（如質(zhì)粒、細(xì)菌、真菌、藻類(lèi)、動(dòng)植物細(xì)胞系等）的，須在專利申請(qǐng)同時(shí)或申請(qǐng)日起四個(gè)月內(nèi)向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交其認(rèn)可單位出具的生物材料保藏和存活證明。

不需要保藏的生物材料：在國(guó)內(nèi)外商業(yè)上公眾能買(mǎi)到的生物材料；各國(guó)專利局或國(guó)際專利組織指定的用于專利程序的保藏機(jī)構(gòu)保藏的生物材料，在向我國(guó)提交的專利申請(qǐng)享有的優(yōu)先權(quán)日或申請(qǐng)日前已在專利公告中公布或已授權(quán)的，均不用保藏。

需要保藏的生物材料：個(gè)人或單位持有的，在非用于專利程序保藏機(jī)構(gòu)保藏的，并對(duì)公眾不公開(kāi)發(fā)放的，或在申請(qǐng)日（優(yōu)先權(quán)日）前公眾不能得到的，如通過(guò)篩選、突變、重組DNA等手段新創(chuàng)制的生物材料，均要求保藏。