數(shù)細胞實驗(觀察植物細胞時顯微鏡使用注意事項)

1.觀察植物細胞時顯微鏡使用注意事項

1.右手握住鏡臂，左手托住鏡座。

2.把顯微鏡放在實驗臺上，略偏左（顯微鏡放在距實驗臺邊緣7厘米左右處）。安裝好目鏡和物鏡。

二、對光 3.轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對準通光孔（物鏡的前端與載物臺要保持2厘 米的距離）。 4.把一個較大的光圈對準通光孔。

左眼注視目鏡內(nèi)（右眼睜開，同時畫圖）。轉(zhuǎn)動反光鏡，使光線通過通光孔反射到鏡筒內(nèi)。

通過目鏡，可以看到白亮的視野。 三、觀察 5.把所要觀察的玻片標本（也可以用印有“6”字的薄紙片制成）放在載物臺上，用壓片夾壓住，標本要正對通光孔的中心。

6.轉(zhuǎn)動粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標本為止（眼睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標本）。 7.左眼向目鏡內(nèi)看，同時反方向轉(zhuǎn)動粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。

再略微轉(zhuǎn)動細準焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 注意事項：實驗完畢，把顯微鏡的外表擦拭干凈。

轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，把兩個物鏡偏到兩旁，并將鏡筒緩緩下降到最低處。最后把顯微鏡放進鏡箱里，送回原處。

其實書上挺詳細的，看看書吧，也許對你會有幫助。

2.Transwell細胞體外侵襲實驗的注意事項

2. 1

NIH3T3 細胞制備的趨化因子與胎牛血清 趨化因子是能使細胞產(chǎn)生趨化運動的一類細胞因子[2 ] 。目前利用NIH3T3 細胞制備趨化因子做細胞體外侵襲實驗的實驗室比較多，時間較長且實驗步驟繁瑣。眾所周知，胎牛血清中有趨化因子，我們在不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細胞體外侵襲能力的強弱實驗中發(fā)現(xiàn)用胎牛血清和用NIH3T3 細胞制備的趨化因子做細胞體外侵襲實驗效果是一樣的，兩組遷移的細胞數(shù)很接近。在實驗時間上，用NIH3 T3細胞制備趨化因子做細胞體外侵襲實驗周期為1 周，而用胎牛血清作趨化因子做細胞體外侵襲實驗周期為2 d ，實驗時間節(jié)省了很多。因此認為可以用胎牛血清來代替NIH3T3 細胞制備的趨化因子。

2. 2 細胞的準備 所需細胞應處在對數(shù)生長期，細胞活力需大于95 %。如果細胞活力小，就會造成細胞穿透能力下降，影響實驗結(jié)果。

2. 3 擦去Matrigel 凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞 先用干棉簽將上室內(nèi)液體吸去，再用蒸餾水浸濕的棉簽輕輕擦去Mat rigel 凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞，如果沒有擦凈聚碳酯膜上表面的細胞，在細胞計數(shù)時就會將沒擦掉的細胞也計進來。尤其是細胞為圓形的時候，就會分辨不出是穿過去的細胞還是沒穿過去的細胞，對于長梭形細胞來說，穿過去的細胞為長梭形，沒穿過去的細胞多為圓形。

2. 4 蘇木素染色 上室浸泡在新蘇木素中的時間為1 min ，用過多次的蘇木素為2 min。在研究粉防己堿對HUVEC 人類臍靜脈內(nèi)皮細胞遷移能力的抑制作用沒有將多余蘇木素洗去，直接脫水、透明，造成細胞圖片背景模糊，細胞不清楚。在作不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細胞體外侵襲能力的強弱實驗時我們將其置于盛有自來水的燒杯中，反復漂洗幾次，將多余蘇木素洗去再行脫水、透明；這樣做出的細胞圖片背景干凈，細胞清楚。

2. 5 脫水和透明時間 脫水時間各為1 min ，在二甲苯中的時間不要過長，以2 min~3 min 為宜；尤其是同時操作多個樣本時，時間過長就會造成部分聚碳酯膜從上室基底部自動脫落下來，上室間粘連在一起，造成樣本混淆，實驗失敗。建議在最后一步實驗時需二人協(xié)做，一人辨別并取出樣本，一人小心將聚碳酯膜自上室基底切取下來，置載玻片上中性樹脂封片并及時編號。

2. 6 細胞計數(shù) 當實驗用的細胞為圓形時，實驗人員容易將聚碳酯膜上小孔誤認為細胞進行計數(shù)。我們在作VEGF 對人結(jié)腸癌HT229 細胞體外侵襲能力的影響時，發(fā)現(xiàn)HT229細胞很小，很容易將聚碳酯膜上小孔誤認為細胞進行計數(shù) 。