重慶高新區(qū)創(chuàng)業(yè)創(chuàng)新大賽
1.蛋白表達(dá)用哪種表達(dá)方式比較好呢?常用的表達(dá)方式是哪種呢
蛋白表達(dá)是指用模式生物如細(xì)菌、酵母、動(dòng)物細(xì)胞或者植物細(xì)胞表達(dá)外源基因蛋白的一種分子生物學(xué)技術(shù)。在基因工程技術(shù)中占有核心地位。
蛋白表達(dá)系統(tǒng)概述
蛋白表達(dá)系統(tǒng)是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系。通過(guò)這個(gè)體系可以實(shí)現(xiàn)外源基因在宿主中表達(dá)的目的。一般由以下幾個(gè)部分組成：
1、宿主。表達(dá)蛋白的生物體?？梢詾榧?xì)菌、酵母、植物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞等。由于各種生物的特性不同，適合表達(dá)蛋白的種類(lèi)也不相同。
2、載體。載體的種類(lèi)與宿主相匹配。根據(jù)宿主不同，分為原核（細(xì)菌）表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、植物表達(dá)載體、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體、昆蟲(chóng)表達(dá)載體等。載體中含有外源基因片段。通過(guò)載體介導(dǎo)，外源基因可以在宿主中表達(dá)。
3、輔助成分。有的表達(dá)系統(tǒng)中還包括了協(xié)助載體進(jìn)入宿主的輔助成分。比如昆蟲(chóng)-桿狀病毒表達(dá)體系中的桿狀病毒。
原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)既是最常用的表達(dá)系統(tǒng)，也是最經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的蛋白表達(dá)系統(tǒng)。原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)以大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)為代表，具有遺傳背景清楚、成本低、表達(dá)量高和表達(dá)產(chǎn)物分離純化相對(duì)簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，缺點(diǎn)主要是蛋白質(zhì)翻譯后缺乏加工機(jī)制，如二硫鍵的形成、蛋白糖基化和正確折疊，得到具有生物活性的蛋白的幾率較小。
酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)以甲醇畢赤酵母為代表，具有表達(dá)量高，可誘導(dǎo)，糖基化機(jī)制接近高等真核生物，分泌蛋白易純化，易實(shí)現(xiàn)高密發(fā)酵等優(yōu)點(diǎn)。缺點(diǎn)為部分蛋白產(chǎn)物易降解，表達(dá)量不可控。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞和昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)主要優(yōu)點(diǎn)是蛋白翻譯后加工機(jī)制最接近體內(nèi)的天然形式，最容易保留生物活性，缺點(diǎn)是表達(dá)量通常較低，穩(wěn)定細(xì)胞系建立技術(shù)難度大，生產(chǎn)成本高。
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